核酸提取与纯化 / 2026-08-26
酚-氯仿法提取DNA
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酚-氯仿法提取DNA
基本原理
在细胞裂解后，向样品中加入一定比例的酚、氯仿和异戊醇混合液（通常为25:24:1）。酚作为蛋白质的强变性剂，能使蛋白质变性并使其溶解于有机相；氯仿有助于增强有机相与水相的分离，并去除溶液中残留的酚；异戊醇则可减少抽提过程中泡沫的产生，同时帮助稳定分层。经离心后，溶液分为三层：上层为含DNA的水相，中间为变性的蛋白质层，下层为有机溶剂相。DNA易溶于水而不溶于有机溶剂，因此保留在水相中；随后通过乙醇或异丙醇沉淀即可获得纯化的DNA。
优点
纯度高、质量好：酚-氯仿法能够有效去除蛋白质和脂质等杂质，提取的DNA纯度高、完整性好，适用于PCR、酶切、Southern blot、文库构建及二代测序等下游分子生物学实验。
成本低廉：相较于商品化试剂盒和自动化提取系统，酚-氯仿法所需试剂成本较低，尤其适合经费有限的实验室。
适用范围广：该方法适用于多种生物样本，包括细胞、组织、血液、体液等。
应用场景
酚-氯仿法广泛应用于各类分子生物学研究场景，包括但不限于：从血液、组织、细胞等样本中提取基因组DNA用于基因分型与遗传分析；从肿瘤组织中提取DNA用于甲基化检测和突变分析；从法医样本（如微量组织、血斑、毛囊等）中提取DNA进行STR分型；以及从鱼类、动物粪便等特殊样本中提取DNA用于生态与微生物研究。